生物指示劑（Biological Indicators, BIs）是評價滅菌過程有效性的核心工具，其生產(chǎn)與性能驗證需嚴格遵循ISO 11138標準，是確保生物指示劑的可靠性、穩(wěn)定性與可追溯性的關鍵。

本文延續(xù)上期對術語和定義的探討，完整闡述從菌懸液制備到抗力測定的全流程要求，為您揭示4大關鍵要點，助您避開生物指示劑滅菌監(jiān)測失敗的陷阱。

一、核心術語標準化定義——清晰界定是基礎

載體（carrier）：可負載試驗微生物的支持材料。

菌種保藏編號 （culture collection number）：由科學界公-認的菌種保藏機構提供的試驗微生物的唯-一編號。

活菌量（viable count）：實際可回收的菌落形成單位或其他合適單位的數(shù)量。

抗力儀（resistometer）：為測量滅菌過程中產(chǎn)生的物理和/或化學參數(shù)相關組合而設計的測量設備。

初級包裝（primary package）：包裝系統(tǒng)的一部分，用于維持產(chǎn)品的完整性。

注:保護染菌載體免受損壞和污染，而不阻礙滅菌因子穿透的系統(tǒng)。

次級包裝（secondary package）：為測量滅菌過程中產(chǎn)生的物理和/或化學參數(shù)相關組合而設計的測量設備。

二、生產(chǎn)規(guī)范要求——嚴控源頭保質量

通過規(guī)范菌懸液制備工藝及全程質控、嚴格執(zhí)行載體與包裝材料標準、強化染菌載體制造全流程管控，實現(xiàn)生物指示劑安全性和穩(wěn)定性的全面提升。

三、孢子數(shù)和抗力測定——關鍵指標定成敗

（一）抗力試驗要求

1、明確目的保性能

抗力試驗的主要目的是證明每批次生物指示劑符合性能要求。

2、判定標準依規(guī)范

試驗要證明每批次生物指示劑滿足既定性能要求。在ISO 11138標準其他部分未明確規(guī)定抗力性能時，依據(jù)ISO 14937中特定關鍵變量定義抗力性能。

3、試驗全面重整合

抗力試驗不僅要測定抗力特性，還需整合活菌計數(shù)步驟，全面準確地評估生物指示劑性能。

4、警示清晰明風險

當孢子數(shù)和/或抗力低于規(guī)定值時，產(chǎn)品標簽上必須有明確警示，提醒使用者注意潛在風險。

（二）試驗微生物與數(shù)量

1、微生物明確且精準

必須清晰規(guī)定試驗微生物，并準確確定其活菌數(shù)。

2、孢子數(shù)驗證有范圍

孢子數(shù)驗證通過的標準是測定結果在制造商標稱值的50%-300%范圍內(nèi)，即使低于文件規(guī)定的最-低孢子數(shù)要求，只要在此比例范圍內(nèi)仍視為合格。

（三）抗力特性測定

1、多種方法相結合

結合使用存活曲線測定D值、陰性分數(shù)法測定D值以及驗證存活-殺滅反應特性三種方法。

2、數(shù)值規(guī)定要達標

測定結果需符合ISO 11138其他部分的規(guī)定，并在生物指示劑標簽上至少標注兩個相關數(shù)據(jù)。

3、標定D值保穩(wěn)定

制造商提供的檢測方法測得的標定D值在有效期內(nèi)應保持在±20%的范圍內(nèi)。存活曲線雖允許一定誤差，但需維持在可接受的線性范圍內(nèi)。

4、存活曲線與抗性水平

計數(shù)法得到的存活曲線顯示活菌抗性超過5×101。陰性分數(shù)法統(tǒng)計分析表明存活試驗中的微生物抗性低于計數(shù)法所得水平。兩種方法測得的D值間展現(xiàn)良好相關性，且與預期線性存活曲線無顯著偏差。

5、特定滅菌方式的額外要求

ISO11138其他部分可能針對特定滅菌方式增加要求，如z值。

6、D值驗證有范圍

在規(guī)定有效期內(nèi)，D值的確認測試結果在±20%范圍內(nèi)即認為初始D值通過驗證，即使低于文件定義的最小D值要求。

7、存活曲線應準確

用存活菌數(shù)的log10對時間所作的半對數(shù)曲線，其線性相關系數(shù)r2應至少達到0.8。

8、試驗條件嚴控制

抗力特性的測定應在指-定的試驗條件下進行，見表2。

四、培養(yǎng)條件與驗證流程——后續(xù)保障不可少

通過規(guī)范培養(yǎng)箱參數(shù)設置，嚴格篩選符合標準的生長培養(yǎng)基及滅菌流程、完善培養(yǎng)周期管控及自動化軟件驗證機制，全面強化生物指示劑培養(yǎng)過程的可控性與結果可靠性。

在實際生產(chǎn)和驗證過程中，務必嚴格按照ISO11138全文及附錄方法執(zhí)行，確保生物指示劑的質量和性能符合規(guī)定，為滅菌過程的有效性提供堅實保障